Ở tế bào bao bó mạch của thực vật chỉ có PSI, TẠO ATP, NADPH cung cấp cho cố định CO2, Chất nhận CO2 đầu tiên là PEP (3C) => AOA (4C) nhờ PEP-caboxylase. Đây là một enzym có hoạt tính cực mạnh, có ái lực với CO2 gấp 100 lần so với enzym RDP-cacboxylase. Do vậy, năng lực cố định CO2 của thực vật C4 là rất lớn và rất hiệu quả. Nó có thể cố định CO2 ở nồng độ cực kỳ thấp. Chính vì vậy mà chu trình C4 đ-ợc chuyên hoá cho việc cố định CO2 có hiệu quả nhất.
Do vậy, các thực vật C4 có 2 enzym cố định CO2 là PEP-cacboxylase của chu trình C4 và RDP-cacboxylase của chu trình C3, trong đó PEP-cacboxylase có nhiệm vụ cố định CO2 đầu tiên và quan trọng nhất.
→ Không có hô hấp sáng, tiết kiệm sản phẩm quang hợp
